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00mercoledì 4 giugno 2008 16:10
Premetto che alcuni termini li abbiamo lasciati in inglese perchè proprio non siamo ruscite a tradurli.
La ricerca provvede cercare metodi per prevenire e trattare i dannosi effetti biologici delle secrezioni biochimiche causate dall’attivazione delle mastcellule nell’organismo degli animali a sangue caldo e specialmente nell’uomo, che possono essere allergie (incluse ma non solo congiuntiviti,riniti allergiche, otiti allergiche,, asma, orticaria, allergie alimentari e dermatiti atopiche), iperproliferativi disagi come leucemia, mastocitosi sistemica, cisitite interstiziale, colon irritabile, infiammazioni intestinali, osteoporosi e sclerodermia.
Il metodo consiste nel somministrare agli animali e specialmente agli esseri umani un’efficace quantità di proteoglicani come la condroitina solfato che ha attività inibitorie sulla secrezione di mastcellule, da sola o in combinazione con uno dei più sinergici coadiuvanti come quelli appartenenti alla classe dei flavonoidi o composti di istamina-1.
Si afferma:
1) un metodo per trattare le allergie atopiche nel mammifero caratterizzate da un numero di mastcellule o livelli di secrezioni biochimiche includendo la somministrazione ai suddetti mammiferi di quantità effettive di proteoglicano con attività inibitoria di secrezione di mastcellule, compresa la condroitina solfato, da sola o insieme ad uno dei più sinergici coadiuvanti.
2) Uno di questi coadiuvanti sono i flavonoidi
3) I flavonoidi sono selezionati da un gruppo composto da myrisetin, quercetina, kaempferol, genisetin, 2-phenylchromone e 2 phenylbenzopyrone
4) Le allergie atopiche sono selezionate da un gruppo composto da asma allergica, riniti allergiche, congiuntiviti allergiche, otite allergica, allergie alimentari e orticaria allergica.
L’idea si riferisce al trattamento dei disturbi causati dall’attivazione di mastcellule, particolarmente alle allergie, alla cistite interstiziale, alle infiammazioni intestinali, alla sindrome del colon irritabile ed alcuni diturbi iperproliferativi come la mastocitosi sistemica con proteoglicano con o senza flavonoidi e/o antagonisti eterociclici dei recettori di istamina.
Le mastcellule sono normali componenti del tessuto connettivo e mucoso e giocano un ruolo importante nelle allergie e nelle infiammazioni.Sono localizzate nel tessuto connettivo, ma anche nella mucosa della vescica, nel tratto gastrointestinale, nei polmoni, così come nella pelle e nelle meningi del cervello.Sono localizzate in questi punti perché questi tessuti sono i maggiori punti di ingresso di agenti infettivi, allergeni ed altri dannosi elementi chimici che attaccano il sistema immunitario.
Le mastcellule arrivano dal midollo spinale e migrano nei tessuti dove vengono sintetizzati e possono secernere numerosi mediatori vasoattivi, nocicettivi e infiammatori(Gallì, S.J.N Engl.J.Med.328:257,1993).
Sono “locatedperivascularly” vicino alle terminazioni nervose e possono essere attivate da una varietà di attacchi neuroimmunoendocrini(Theoharides,T.C.Int.J Tissue React.18:1,1996).
Le mastcellule sono localizzate in strategici punti intorno ai capillari e ai piccoli vasi sanguigni, dove svolgono un ruolo importante nel regolare l’estensione della costrizione o dilatazione dei vasi inclusi quelli che reintegrano la barriera sanguigna e protettiva del cervello che esclude materiale tossico.
Ogni mastcellula è divisa in 500 granuli secretori, ognuno dei quali immagazzina più di 20 componenti biologiche.
Le mastcellule secernono il contenuto di questi granuli(I.e. degranulati)quando vengono colpite da vari specifici e non specifici meccanismi, così come le reazioni allergiche coinvolgono immunoglobulina E(IgE) e antigeni(Ag).
Degni di nota tra gli attacchi non allergici sono alcuni polisaccaridi e monosaccaridi contenenti lectina così come dextran e concanavalin A(Baxter, J H et al, Biochemical Pharm.27:497,1978).
Altri conosciuti attacchi includonoil neurotrasmettitore acetylcholine, vari neuropeptidi come calcitonin-gene-related peptide(CGRP), corticotropin-releasinghormone(CRH), neurotensis(NT), sostanza P(SP), somatostatina e peptide vasoattiva intestinale(VIP) così come virus, tossine batteriche, droghe(come aspirina,morfina e curaro), mezzi di contrasto utilizzati in radiologia, eccessivo calore, freddo, radiazioni solari, mezzi iperosmotici e pressione(Theoharides, ibiol).
I composti rilasciati dalle mastcellule sono conosciuti come causa di molte risposte biologiche del corpo come invasioni infettive dell’organismo, allergeni o altri stress.La degranulazione sarà determinata in questo punto come il rilascio di alcuni o tutti i mediatori da alcuni o tutti i granuli secretori, o parallelamente o sequenzialmente o differenzialmente o selettivamente.Esempi rilevanti di alcune risposte sono la vasodilatazione e coscrizione, cellule “ofinflammatory”(e.g.leucociti) della circolazione, lacrimazione, secrezioni nasali, bronchiti, pruriti della pelle, diarrea e dolore vescicale.
L’istamina e altri mediatori sono secreti dai granuli delle mastcellule durante la degranulazione.L’istamina e altri mediatori sono legati a specifici recettori sulla superficie delle cellule endoteliali dei vasi sanguigni, neuroni e altri tessuti.
La vasodilatazione e la chemoattrazione permettono ai linfociti di abbandonare la circolazione del sangue ed entrare nei tessuti, dove causano aumento di mastcellule e altre risposte.
Il processo di degranulazione continua, coinvolgendo altre mastcellule.
E’ importante sapere che non esistono farmaci in grado di bloccare la secrezione di mastociti.L’antistamina, conosciuta come antagonista dei recettori di istamina,agisce solo dopo il rilascio di istamina(Theoharides,T.C.,Drugs 37:345,1989).
Non bloccano nemmeno la secrezione di istamina o altri mediatori.Il disodium cromoglycate(cromolyn) è chiamato “stabilizzatore di mastcellule”ed è utile per asma, riniti e allergie alimentari ma i suoi effetti sono di breve durata, parzialmente efficaci ed è difficile trovare soluzione(Shapiro,G.G.et al.,Pharmacotherapy 5:156,1985).
La comune forma di cistite interstiziale è quella iniziale senza ulcere con capacità vescicale normale e assenza di infiammazione.Il ruolo delle mastcellule nella vescica acquisisce un significativo aumento del loro numero(Theoharides,T.C.et al.,Sem.Urol.9:74,1991).
Inoltre lo stress da immobilizzazione acuta causa rilascio di granuli pro-infiammatori da parte delle mastcellule della vescica(Spanos et al.,Urol.,157:669,1997).
Le mastcellule sono implicate anche nella sindrome del colon irritabile(IBS)(Weston,AP et al,Digestive Disease and Sciences 38:1590,1993)dove aumentano di numero o vengono attivate in gradi diversi(Pang,x et al.,Urology 47:436,1996).
Inoltre l’istamina e le prostaglandine sono coinvolte nella permeabilità gastrointestinale e collegate alla diarrea.(Castaglluolo,I et al,Am.J.Physiol 271:884,1996).
Recenti studi hanno mostrato che lo stress da immobilizzazione acuta provoca l’attivazione delle mastcellule gastrointestinali, un processo bloccato da un pretrattamento con un antisiero neutralizzante di corticotropina che rilascia un ormone(CRH) che si libera sotto stress.(Castaglluolo,I et al.,above).Abbiamo anche mostrato che il CRH può indurre la degranulazione delle mastcellule e aumentare direttamente la permeabilità vascolare.(Theoharides,T.C. et al,Endocrinology 139:403,1998).
Il termine disturbo infiammatorio dell’intestino(IBD) è utilizzato per descrivere una varietà di disturbi.
La sindrome di Chron, così come una varietà di forme infettive di diarrea,simile a quella causata da Clostridium che è chiamata colite pseudomembranosa, sono le più comuni forme infiammatorie intestinali.Recenti scoperte indicano che le mastcellule sono presenti nella mucosa del piccolo intestino e sono diverse rispetto a quelle del tessuto connettivo.
Inoltre abbiamo scoperto che sono molto vicine alle terminazioni nervose e possono quindi intaccare il sistema nervoso.Infatti le membrane gastrointestinali sono attivate nella sindrome di Chron(Dvorak et al.Int.Arch.Allergy Immunol.,98:158,1992).
E’ stato dimostrato in vitro che la secrezione di mastcellule viene stimolata dall’ormone paratiroide(PTH).(Tsakalos,ND et al,Biochemical Pharmacology 32:355,1983).Inoltre è stato dimostrato che la PHT aumenta l’accumulazione di mastcellule nelle ossa.(Rockoft,S.D.et al.,Calc.Tiss.Res.5:49,1970).
Le molecole secrete dalle mastcellule possono aumentare il riassorbimento delle ossa,indebolendole, come risulta negli individui affetti da osteoporosi.Infatti l’osteoporosi è vista nell’uomo come una mastocitosi del midollo osseo(Lidor,C.et al.,journal of Bone and Mineral Research 5:871-876,1990).
Durante uno studio sulla risposta delle ossa a scarsa somministrazione di calcio, è stata osservata una drammatica crescita delle mastcellule nella tibia.Infine ci sono molti recenti casi di osteoporosi associati a mastocitosi sistemica.(Chines,A.,et all.,J.Am.Acad.Dermatol.32:545,1995).
La sclerodermia è una malattia autoimmune che colpisce le donne 5 volte in più rispetto agli uomini.Coinvolge tutto il corpo ma si manifesta principalmente sulla pelle che è progressivamente sostituita da tessuti fibrotici rendendola inspessita e invecchiata.Altre manifestazioni periferiche sono il fenomeno di Raynaud,che è caretterizzato da intensa vasocostrizione delle vene della mano e porta ipossia e dolore.Le cellule mastocite sono spesso associate a questa malattia.Non vi è una terapia efficace per questa condizione anche se inibitori del calcio come nifedipina verapamil(isoptin)sono stati usati. I proteoglicani sono ad alto peso molecolare più importanti delle macromolecole(heteropolysaccharide:classe di carboidrati)che consistono di vari tipi di glicosammoglicani concatenati e condivisi alla parte centrale di una proteina che costituisce all'incirca il 5 % del totale delle macromolecole. I componenti dei monosaccarosi dei proteoglicani,come glucosio nine solfato N-acetilcisteina,D-glucosamine sono anche reperibili in commercio.Sei distinte classi di protoeglicani sono adesso riconosciute:solfato di chondroitin, solfato di dermaten,eparina e i suoi solfati solfato di keratina e acido ialuronico. Il solfato di chondroitin,come gli altri proteoglicani,che si produce naturalmente,ed è un costituente naturale del tessuto connetivo.E' reperibile nei negozi come integratore alimentare. I flavonoidi sono stati usati per inibire la secrezione delle cellule mastocite.Tuttavia l'unico uso testato di flavoinidi è l'uso di flavoinidi campheral (forte antiossidante) per una preparazione dermatologica per stimolare la pigmentazione della pelle o la crescita superficiale corporea.I flavonoidi sono molecole presenti naturalmente. La media giornaliera nella dieta USA contiene 1 gr di un misto di flavonoidi.Tuttavia alcuni concentrati di flavonoidi sono venduti nei negozi come integratori alimentari.(pycnogenal,25mg capsule da Countrylife Hanppange NY,o quercitina 300mg tavolette da Allergy Research Grove Calif.o Freeman industries,Tuckahoe NY).Comunque nè i proteoglicani con o senza flavoinidi sono stati adottati per uso terapeutico delle condizioni cliniche sopra descritte.
Riassunto dell'invenzione L'invenzione fornisce un metodo di prevenzione e cura gli effetti biologici nocivi delle secrezioni biochimiche delle cellule mastocite degli animali a sangue caldo e in particolare gli esseri umani. Questi effetti biologici nocivi associati con le allergie(incluse ma non limitate alle congiuntivite allergica,rinite allergica,otite allergica e dermatite atopica)cistite interstiziale infiammazione intestinale,sindrome dell'intestino irritabile,sclerodermia,osteoporosi disturbi hyperproliferative come sistema mastocita e leucemia. Nel primo aspetto dell'invenzione il metodo consiste di somministrare agli animali e specialmente ad esseri umani un efficace importo di proteoglicano solfato di chondroint con la secrezione delle cellule inibitorie,solfato di keratan, solfato di anddermatan.Nel secondo aspetto dell'invenzione,il metodo consiste di somministrare un proteogkicano combinato con uno o più sinergici coadiuvanti(come quelli che appartengono alla classe dei flavonoidi come myricetin,ginisetin,kaempherae) o composti eterociclici con istamina recettore antagonista attività
.Questi e altri aspetti appariranno più chiari con riferimento a descrizioni specifiche e apposite richieste. Descrizionedel processo di elaborazione (di un incarnazione perfetto).E' stato inaspettatamente scoperto che le malattie derivanti da processi biochimici causate da cellule mastocite attivate possono essere trattate con successo con proteoglicani da soli o combinati con uno o più sinergici coadiuvanti come flavoinidi eterociclici istamina con attività antagonista del recettore.Il metodo della presente invenzione consiste nella somministrazione giornaliera per pazienti affetti da allergia,condizione di circa 100 a circa 5000mg di un proteoglicano come solfato di di chondroitin.La somministrazione orale o l'applicazione locale delle zone colpite è preferibile in modo che il paziente può automedicarsi.In conformità con la presente invenzione,i proteoglicani possono essere somministrati ai pazienti in ogni forma convenzionale orale o parenterale sotto forma di dosaggio che renderanno il farmaco più efficace sulla pelle a livello della mucosa o superfici. Forme di dosaggio orale possono includere, capsule tavolette liquidi o simili,includono generalmente solfato di chondroitin da circa 200 a 2000mg per ogni somministrazione insieme con flavoinidi e /o composti eterociclici richiesti e adattati con i metodi di fabbricazione farmaucetica,leganti,dolcificanti,coloranti,agenti convenzionali e di altri additivi.Le forme di dosaggio parentale possono contenere qualsiasi soluzione convenzionale di solfato chondroitin,ad esempio una soluzione salina isotonica composta con preservanti accettati dalla farmaceutica e (buffer).Le forme di dosaggio parentale contengono generalmente solfato di chondroit da circa 50 a circa 250mg e possono essre somministrate con un contagocce per la congiuntivite allergica,spray per la rinite allergica inalatotore per l'asma allergica,installazioni per la cistite interstiziale o con una crema o unguento per dermatite allergica o orticaria.In
un metodo preferito,un proteoglicano inizialmente può essere somministrato ai pazienti in via orale in dose giornaliera di circa 500mg di ciascuno, con incrementi graduali fino ad un massimo di 2500mg(b.i.d.).Dove indicato i flavoinidi o antagonisti dei recettori di istamina vengono somministrati insieme a un proteoglicano a dosi di circa 2500mg di proteoglicani circa 500mg di flavoinidi e /o circa di istamina 1 recettore antagonista.Il metodo d'invenzione inoltre fornisce un notevole sollievo sintomatico per pazienti sofferenti di cistite interstiziale e sindrome dell'intestino irritabile sanche se le modalità convenzionale del trattamento hanno fallito.Pazienti sottoposti al trattamento sperimentale di solfato di chondroitin riportano diminuzione urinaria e frequenza del movimento intestinale,rispettivamente e associano dolore a causa di azioni additivi che non si trova in nessun farmaco approvato o in sperimentazione a) l'inibizione di secrezione dalle cellule mucosalmastocite che sono stati trovatia prolificare ed essere attivate nella parete della vescica dei pazienti sofferenti di cistite interstiziale o nelle pareti intestinali in pazienti sofferenti da sindrome dell'intestino irritabile b)formando una proteina che copre le mucose della superfice della vescica e l'intestino.Il metodo d'invenzione può essere usato anche per prevenire o curare la secrezione delle malattie connesse come l'osteoporosi,la sclerodermia(o scerosi sistemica).Inoltre il metodo d'invenzione può essere utilizzato per il trattamento di hyperproliferativediseases che coinvolge le cellule mastocite come ad esempio la leucemia e sistemiche mastocistiti.Gli esempi che seguono forniscono una dettagliata illustrazione dei metodi di gestione dei componenti come richiesto nella presente invenzione. Questi esempi non sono intesi a limitare o restringere l'applicazione dell'invenzione in qualsiasi modo,e non devono essere intesi come forme di dosaggi o metodi di gestione che devono essere utilizzati esclusivamente per mettere in atto l'invenzione.
ESEMPIO 1
Abbiamo studiato l’effetto della condroitina solfato sulla secrezione di istamina dalle mastcellule purificate dalle cavità peritoneali dei ratti maschi Sprague/Dawnley(300g, Charles River) più 25% Metrizamide(Accurate Scientific).Le mastcellule sono state preincubate con 10.sup.-5 M saccaride per 60 minuti a 37 gradi C. seguite da due lavaggi e risospensione saccaride-free medium prima della stimolazione con 10.sup.-5 M di mastcellule secretagogue, composto 48/80(C48/80) o la neuropeptide sostanza P(SP).Asthe cellule sono state lavate dal saccaride, ogni effetto inibitorio non era dovuto a nessuna interferenza con legami di C48/80 o Sp sulla superficie delle cellule.Di conseguenza, questo effetto si differenzia dai risultati che mostrano che alcuni monosaccaridi contenenti lectinsinhibit C48/80 inducono la secrezione di mastcellule(Matsuda, K.,et al.,jpn.J.Pharmacol.64:1,1994).I risultati mostrano che la condroitina solfato può potenzialmente inibire l’attivazione di mastcellule come mostrato nella Tabella 1.
Tabella1-Inibizione di secrezione mastcellule da secrezione di mastcellula saccaride(% di inibizione)Saccaride C48/80(n=4)SP(n=3)D-Glucosammina solfato(a) 33.7.+-.18.1 N-acetyl-glucosammina(b)37.4.+-.10.5 30.8.+-.6.5 Condroitina solfato.COPYRGT.75.4.+-.3.6 38.1.+-.12.2 Combinazione (a, b & c)77.7.+-.8.3 47.6.+.10.0
La condroitina solfato può esercitare al massimo 2 benefiche azioni:a)protezione della mucosa vescicale, b)inibizione dell’attivazione delle mastcellule.(Teoharides,T.C.,et al.,Intl.Res.Symp. su cistite interstiziale(Oct.30-31,1997),p.35,1997).
ESEMPIO 2
Sinergico effetto inibitore della Condroitina solfato e Quercetina sulla secrezione di mastcellule e sui suoi benefici nelle condizioni gastrointestinali.
Qui, abbiamo studiato gli effetti del polisaccaride condroitina solfato e del flavonoide quercetina sulla secrezione di istamina da mastcellule purificate da 300 mg su ratti maschi Sprague/Dawley.Le mastcellule sono state preincubate con un test composto per 15 minuti a 37 gradi C e lavati 2 volte prima della stimolazione con 0.1.mug/ml del composto secretagogue 48/80(C48/80) per 10 minuti.La condroitina solfato(presa dalla cartilagine dello squalo) inibisce l’attivazione delle mastcellule in una dose dipendente con massima inibizione del 83% a 10.sup.-4M(Tabella 2);un effetto simile è stato visto anche con la quercetina naturale in vitro, ma doveva essere presente ininterrottamente.
Una combinazione di 10.sup.-6 M condroitina solfato e 10.sup.-6 M quercetina ha esibito un sinergico effetto di inibizione più o meno del 30% solo dopo l’eliminazione di droghe.I ratti di peso 10mg/kg non hanno mostrato attivazione di mastcellule per 30 minuti sotto stress da immobilizzazione acuta.Una combinazione di questi prodotti naturali vantaggiosi OTC possono essere usati per la prevenzione dello stress indotto dalla sindrome gastrointestinale,così come la sindrome del colon irritabile o dell’intestino infiammato.
TABLE2 Inibizione della secrezione di mastcellule,% di condizioni totali(n=4)Secrezione di mastcellule(n=3)Control 5.3.+-0.4 C84/80 31.5.+-.6.3 Quercetina(10.sup.-6M)30.5.+-.0,5 Condroitina solfato(10.sup.-6M)31.0.+-.2.9 condroitina solfato(10.sup.-5 M)15.3.+-2.7Condroitina solfato(10.sup.-4M)5.3.+-.1.3 CS+Q(10.sup.-6M)17.7.+-7.1
ESEMPIO 3
Mastcellule leucemiche umane
La coltura di mastcellule leucemiche umane in presenza di condroitina solfato è risultata in potente inibizione di crescita, come mostrato nella Tabella 3.La viabilità delle cellule era intorno al 90% o di più.
TABLE 3 inibizione (%) della proliferazione di mastcellule leucemiche umane(n=5)Day 10.sup.-4M 10.sup.-5M 10.sup.6M 10.sup.-7M 3 57.8.+-.13.3 44.3.+-.12.7 27.2.+-.12.1 12.6.+-.9.6 4 53.1.+-.8.9 38.9..+-.9.1 25.3.+-.9.6 14.9.+-.6.9 5 52.4.+-.13.9 31.2.+-.15.8 20.7.+-.15.2 14.7.+-.6.8.
Di conseguenza, la condroitina solfato può essere utilizzata nelle condizioni di proliferazione delle mastcellule, associate all’attivazione delle mastcellule, come nella mastocitosi sistemica(Longley,M.D.,et al.,American Academy of Dermatology 32:545,1995) o nella cisitite interstiziale.(Theoharides,T.C.,et al,New York Academy of Sciences 840:619,1998 e Theoharides,T.C.,The Mastocytosis Chronicle Vol.4,winter,1998).
La Condroitina Solfato e il kaempferolo possono essere somministrati in dosaggi di 50mg fino a circa 5.000 mg per soggetti di 80 kg.La combinazione preferita degli ingredienti per una miglior assunzione può essere la seguente:
Ingredienti Mg/capsule di Condroitina solfato 2000 mg, Quercetina,kaempferolo o flavonoidi 500 Mg Milk sugar(12 mesh granular)25 mg Starch20 mg Magnesium Stereate 0.4 mg.
ESEMPIO 5
Creme per la pelle antiallergiche
Components %/wt. Chondroitin sulfate 5.00 Kaempherol and/or quercetin 3.00 Hydroxyzine pamoate 4.50 Olive pit oil 15.00 Lanolin 1.00 Glycerin 5.00 Methyl benzethonium chloride 0.10 Magnesium chloride 0.07 Ferrous sulfate 0.001 Potassium chloride 0.012 Sodium chloride 0.02 Zinc oxide 2.50 Vitamin A (retinyl palmatate) 0.01 (20K IU) Vitamin C 0.10 Vitamin D 0.01 (4K IU) Vitamin E (tocopherol linoate) 1.00 (20K IU) Sodium dihydrogen phosphate 0.002 Nonionic emulsion base62.475 glyceryl monosterate safflower oil, hybrid, 5.0% steareth-2 steareth-21 stearyl alcohol water, purified Quaternium 15 (preservative) 0.20
ESEMPI TERAPEUTICI
ESEMPIO 6
Ad una donna di 35 anni con allergie multiple e cistite interstiziale è stata somministrata una formulazione contenente 200 mg di condroitina solfato con 1000 mg di glucosammina, 3 capsule al dì, per 2 mesi ed è stata riportata una quasi completa remissione dei loro sintomi gastrointestinali di diarrea, gonfiore, dolore associati a prurito della pelle
ESEMPIO 7
Ad una donna di 28 anni con mastocitosi sistemica venne somministrata una formulazione contenente 1,200 mg di condroitina solfato mixati a 500 mg di flavonoidi per 3 mesi.Riportò completa remissione dei sintomi gastrointestinali,infiammazione della pelle e prurito(orticaria pigmentosa)e dolori alle giunture.
ESEMPIO 8
Ad un uomo di 42 anni con dermatite atopica estesa alle mani, braccia e gomiti venne applicata la crema prima indicata per un mese con sostanziale riduzione del rossore,prurito e desquamazione.
Traduzione Aly e Cinzia